快速、高精确度的
细胞外囊泡(EVs)分离

由于细胞外囊泡 (EVs)/外泌体体积较小,通常存在于复杂的生物液体中,以及这些囊泡的脆弱特性,所以分离它们并不简单。Izon 的 qEV 色谱柱能够从多种液体 (包括唾液、复杂的生物环境如血浆和细胞培养上清液等) 中分离出高纯度的完好的EVs/外泌体。通过尺寸排阻色谱法,qEV 色谱柱可快速 (<15分钟) 、有效地将其分离到用户指定的体积和缓冲液中。
qEV 产品系列一览
Automatic fraction collector (AFC) side on right
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快速、简便、可靠

qEV 色谱柱需要极少的用户干预,可在 15 分钟内洗脱完整的 EVs/外泌体。结果的可重复性和可靠性已在不同实验室之间的试验中得到证实。
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可标准化和可重复性

qEV分离纯化平台包括自动馏分收集器(AFC)和qEV尺寸排阻纯化柱。自动化运行减少了人工操作的误差。每根纯化柱均为标准化的、有质量保证的和通过 ISO 13485 标准 (医疗设备) 认证的。
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高纯度、干净的分离样品

qEV 柱提供干净、高纯度样品的同时不会影响EVs/外泌体的结构和功能。
图 1.
可溶蛋白,细胞外囊泡(EV)以及人血浆中大小相似颗粒(>60 nm)在qEVoriginal/35 nm Gen 2和qEVoriginal/70 nm Gen 2色谱柱上流出图 (0.5 mL人血浆上样量)。 EV浓度采用Exoid测定,蛋白水平采用bicinchoninic acid (BCA)法测定。 褪色的条形图代表由合并馏分测量值计算得出的单馏分浓度。  *体积标记为该样品中最大的体积,“0.4”标记为空隙体积后0.0-0.4 mL,“0.8”标记为空隙体积后0.4-0.8 mL,以此类推。

快速、温和、精确的 EV 分离。

在大多数情况下,qEV 色谱柱可除去 99% 以上的可溶性蛋白质污染物。色谱柱与大多数生理相关性缓冲液兼容,这意味着可以在适合于电子显微镜、蛋白质组学、RNA 分析、物理测量和其它下游分析的条件下获得高产量的 EVs/外泌体。

根据研究优化

快速增长的 qEV 系列目前包括 6 种不同的色谱柱。

高纯度

实验证明除去可高达99% 的可溶性蛋白质
Automatic fraction collector (AFC) front on

外泌体分离的新标准

在 SEC 色谱柱出现之前,超速离心 (UC) 被认为是浓缩和分离 EVs/外泌体的金标准。UC 耗时且无法提供一致的标准化样品。UC 操作中高达 200,000g 的超高离心力会影响、破坏和聚集囊泡,因此可能会使大部分研究失效。

此外,含 EVs/外泌体的离心沉淀物中存在聚集的蛋白质和核酸污染物。密度梯度离心 (DGC) 目的是提高 UC 分离法获得的EVs/外泌体的纯度,但同时它也使分离程序复杂化和使分离时间延长,而且还降低了 EVs/外泌体的产量。UC 或 DGC 都无法实现不同实验室间的标准化采样。沉淀试剂盒已被用于EVs/外泌体纯化。这些试剂盒通常为 PEG 基聚合物,可沉淀多种产物,而不仅仅是 EVs/外泌体。已发表的独立数据表明,这些沉淀产物中含有大量的非 EVs 材料污染物,因为上述沉淀试剂可导致与蛋白质、脂蛋白和其它生物成分形成共沉淀。qEV SEC 色谱柱可提供高纯度的样品而不会影响 EVs/外泌体 的结构或功能。沉淀试剂盒提供的是不纯净的样品而且不同批次间也存在差异。EV 领域的先锋研究人员已不再使用或推荐沉淀方法。

qEV 分离纯化的工作原理

qEV 基于分子排阻色谱法 (SEC)。分子排阻色谱法使用由多孔树脂颗粒组成的固定相。小于分离范围 (35nm+ 或 70nm+) 的分子会因进入固定相的孔隙而流速减慢。无法进入孔隙的较大颗粒在树脂周围流动并较早从色谱柱中洗脱。

qEV - 已实现自动化和可高度规模化

这是世界上第一个自动化、智能型细胞外囊泡分离系统。Izon 自动馏分收集器 (AFC) 可快速、精确、自动化分离 EVs,是对 qEV 平台的一个重大提升。到目前为止,qEV 过程一直非常费力且难以规模化。AFC 让 qEV 分离纯化过程自动化,从而消除了人为误差,实现了高精确度、大规模、标准化的EVs/外泌体分离。EVs 分离的新时代已经到来。
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Automatic fraction collector (AFC) side on right

第二代Gen 2 qEV 推出

新一代的qEV色谱柱由专有的琼脂糖树脂制成,可提供更纯净的细胞胞外囊泡(EV)。 Gen 2 qEV色谱柱的发布符合且支持了快速增长的EV研究和应用领域的需要,其中样品纯度对下游结果有巨大的影响。

右图,显示了Legacy和Gen 2 qEVoriginal色谱柱的对比。样品均为相同0.5 mL的人血浆样本。
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根据研究选择优化的EV外泌体分离色谱柱

目前有 6 种不同的 Izon 色谱柱尺寸可供选择,每种都有 2 个分离范围 (标示 35 nm或 70 nm)。每种色谱柱都有其自身的优点。

选择您的色谱柱尺寸

/ 步骤 1

有六种 qEV 色谱柱尺寸可供选择:qEVsingle、qEVoriginal、qEV1、qEV2、qEV10 和 qEV100。
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qEVsingle
< 150 µL
样品加载 (推荐用于获得最高纯度).
适用于临床样品、RT-PCR
优化用于小样品。无 RNA 残留 (单次使用)。与自动馏分收集器兼容。
单次使用
可用树脂填料类型
Gen 2 & Legacy
qEVoriginal
< 500 µL
样品加载 (推荐用于获得最高纯度)。
适用于更大容量的研究
最早和最受欢迎的 qEV 色谱柱。与自动馏分收集器兼容。
可重复使用
多达 5 次。
可用树脂填料类型
Gen 2 & Legacy
qEV1
< 1 mL
样品加载 (推荐用于获得最高纯度)。
适用于更大容量的研究
最新推出的 qEV 色谱柱。与自动馏分收集器兼容。
可重复使用
多达 5 次。
可用树脂填料类型
Gen 2
qEV2 column
qEV2
< 2 mL
样品加载 (推荐用于获得最高纯度)。
适用于较大的临床样品和用于 RNA 分析的制剂
包括双鲁尔锁接头。与自动馏分收集器兼容
可重复使用
多达 5 次。
可用树脂填料类型
Legacy
qEV10 column
qEV10
< 10 mL
样品加载 (推荐用于获得最高纯度)。
适用于大体积的细胞培养上清液
包括双鲁尔锁接头。与自动馏分收集器兼容。
可重复使用
多达 5 次。
可用树脂填料类型
Gen 2 & Legacy
qEV 100 column
qEV100
< 100 mL
样品加载 (推荐用于获得最高纯度)。
适用于大规模、快速 EV 分离
包括双鲁尔锁接头。
可重复使用
多达 5 次。
可用树脂填料类型
Legacy

选择您的分离范围

/ 步骤 2

6 种不同的色谱柱尺寸中,每一种目前均有两个分离范围可供选择 (35nm+ 和 70nm+)。大众化的 70nm+ qEV 色谱柱对 70nm 至 1000nm 的颗粒具有最佳回收率,而较新的 35nm+ 色谱柱的最佳回收范围是 35nm 至 350nm。
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